1.准备工作
设备与材料准备:确保微流控制备仪及其配套设备(如注射泵、压力控制器等)正常工作,准备好所需的试剂和样品,包括脂质溶液、mRNA 溶液、缓冲液等。
芯片安装:根据实验要求选择合适的微流控芯片,并正确安装在制备仪上。注意芯片的方向和位置,确保其与仪器连接紧密且无泄漏。
2.系统设置
参数设定:在仪器的操作界面上设定所需的参数,如流速、压力、混合时间等。这些参数应根据具体的实验需求和样品特性进行调整,以确保最佳的制备效果。
清洗与校准:使用适当的溶剂对微流控系统进行清洗,去除残留的杂质和气泡。然后进行校准操作,确保仪器的准确性和稳定性。
3.样品制备
试剂配制:按照实验配方准确配制脂质溶液和 mRNA 溶液。脂质溶液通常由多种脂质成分溶解在有机溶剂中制成,而 mRNA 溶液则需要将纯化的 mRNA 溶解在缓冲液中。
过滤处理:将配制好的脂质溶液和 mRNA 溶液通过 0.22 微米或更小孔径的滤膜进行过滤,以去除可能存在的颗粒杂质,防止堵塞微流控芯片的通道。
4.mRNA微流控混合
进样:将过滤后的脂质溶液和 mRNA 溶液分别吸入相应的注射器中,并将注射器安装在注射泵上。然后,将注射器的出口与微流控芯片的入口连接,确保连接牢固且无泄漏。
启动混合:启动注射泵,按照设定的流速将脂质溶液和 mRNA 溶液同时注入微流控芯片中。在芯片的微通道内,两种溶液会在精确控制的流速下快速混合,形成脂质纳米颗粒包裹的 mRNA。
收集产物:从微流控芯片的出口收集制备得到的 mRNA-LNP 溶液,可根据需要进一步进行处理和分析,如粒径检测、包封率测定等。
5.后处理与分析
产物处理:对收集到的 mRNA-LNP 溶液进行必要的后处理,如透析、超滤等,以去除未反应的试剂和副产物,提高产物的纯度和质量。
质量检测:使用动态光散射仪、透射电子显微镜等仪器设备对制备得到的 mRNA-LNP 进行粒径分布、形态结构等质量检测,确保其符合预期的要求。
数据记录与分析:记录实验过程中的各项参数和数据,如流速、压力、温度等,以及产物的质量检测结果。对数据进行分析和总结,评估实验效果,为后续的实验优化提供依据。
