2025年9月20日 ，长春兽医研究所扈荣良团队在《Emerging Microbes & Infections》上发表了题为" Deletion of the African swine fever virus E120R gene completely attenuates its virulence by enhancing host innate immunity and impairing virus release "的学术论文。
本次研究通过同源重组技术，用含p72启动子和mCherry的报告基因盒替换ASFV SY18的E120R基因，转染骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)后，结合荧光筛选与有限稀释法分离重组病毒ASFV-ΔE120R，再经艾特森LDS-L2型超滤设备去除宿主细胞碎片纯化病毒。
研究背景
非洲猪瘟病毒(ASFV)致家猪致命性出血病，威胁全球养猪业，目前无有效商用疫苗或药物。现有减毒活疫苗存在毒力返强、病毒排毒风险，影响临床应用。鉴于E120R基因功能未明确且此前构建其缺失株未果，本研究以高致病性Ⅱ型SY18株为基础，构建E120R基因缺失重组病毒ASFV-ΔE120R，探究E120R基因功能，评估该缺失株的减毒特性、安全性、免疫原性及对亲本病毒的保护效力，为非洲猪瘟疫苗研发提供新靶标与候选株。
1. 实验过程
图例1：siGSDMD-LNPs的制备流程及脓毒症缓解机制示意图
2. ASFV-ΔE120R的构建验证与体外复制能力分析
研究团队通过PCR、测序和Western blot证实E120R基因被成功敲除；生长曲线显示该缺失株在猪肺泡巨噬细胞中的复制能力显著低于野生株。
图例2：ASFV-ΔE120R的构建验证与体外复制能力分析
3. ASFV-ΔE120R感染细胞的异常形态观察
研究团队进一步通过透射电镜发现：缺失株感染细胞24小时出现异常管状结构，48小时阳性细胞占比达84%，而野生株无此结构，说明E120R的缺失会破坏病毒粒子的正常形态。
图例3：ASFV-ΔE120R感染细胞的异常形态观察
4. E120R缺失对病毒粒子释放能力的影响
研究团队在电镜结果上未观察到缺失株的出芽过程，但病毒滴度检测结果显示，24-48小时内缺失株上清液病毒滴度比野生株低1-2个log₁₀TCID₅₀/mL，证实其病毒释放能力受损。
图例4：E120R缺失对病毒粒子释放能力的影响
5.ASFV-ΔE120R对康复猪血清的敏感性检测
荧光显微镜、病毒滴度及基因组拷贝检测结果显示，康复猪血清可显著抑制缺失株的复制，而对野生株和ASFV-ΔI267L无明显作用，说明缺失株的抗原表位暴露状态发生改变，更容易被康复猪血清中的抗体识别并中和。
图例5：ASFV-ΔE120R对康复猪血清的敏感性检测
6. ASFV-ΔE120R激活宿主抗病毒免疫的分子机制
RNA测序热图显示，缺失株感染后趋化因子、干扰素刺激基因等抗病毒基因表达显著上调；GO和KEGG富集分析表明差异基因富集于固有免疫和炎症信号通路上。
图例6：ASFV-ΔE120R激活宿主抗病毒免疫的分子机制
7. ASFV-ΔE120R体内安全性及无病毒残留验证
研究团队进一步验ASFV-ΔE120R体内安全性，研究发现免疫仔猪的组织病理切片无非洲猪瘟典型病变；qPCR和细胞培养未检测到组织中的病毒核酸和活性病毒，证明该毒株在体内无法复制和残留。
图例7：ASFV-ΔE120R体内安全性及无病毒残留验证
8. ASFV-ΔE120R的体内安全性与免疫原性评估
随后，研究团队对免疫仔猪体内免疫原性进行评估，实验结果表明：28天观察期内体温正常、无临床症状、无病毒排毒；ELISA实验显示加强免疫后所有仔猪产生p54特异性抗体；ELISpot证实其可诱导IFN-γ分泌型PBMC应答。
图例8：ASFV-ΔE120R的体内安全性与免疫原性评估
9. ASFV-ΔE120R对亲本毒株攻毒的保护效果分析
研究团队发现，对5头免疫猪进行攻毒实验，其中2头存活，存活猪无明显临床症状、组织无病毒核酸，抗体水平和 IFN-γ 分泌细胞数量显著升高，CD8⁺IFN-γ⁺ T 细胞比例上调。
图例9：ASFV-ΔE120R对亲本毒株攻毒的保护效果分析
10. ASFV-ΔE120R 免疫减轻攻毒后组织病理损伤
野生株对照组出现严重器官出血、坏死；存活免疫猪仅扁桃体轻微淋巴细胞坏死，其他器官无病理异常，组织病理评分显著低于对照组。
图例10：ASFV-ΔE120R免疫减轻攻毒后组织病理损伤
知识分享：研究亮点
1 本研究以高致病性Ⅱ型非洲猪瘟病毒SY18株为基础，首次成功构建E120R基因缺失重组病毒ASFV-ΔE120R，突破此前E120R基因被认为可能对病毒复制至关重要的研究认知，明确其非必需性及作为疫苗靶标的潜力。
2 采研究发现ASFV-ΔE120R通过形成异常管状结构、显著降低病毒粒子释放能力实现完全减毒，且能更强激活宿主固有免疫(如上调趋化因子、干扰素刺激基因表达)，同时在免疫猪体内无病毒排毒，解决传统减毒疫苗排毒及毒力返强的关键问题。
3 动物实验证实ASFV-ΔE120R安全性良好，可诱导体液与细胞免疫应答，对亲本病毒SY18攻毒提供40%保护率，为非洲猪瘟安全高效减毒活疫苗研发提供新靶标与候选株。
参考文献：
Emerging Microbes & Infections ( IF 5.5 ) Pub Date : 2025-09-20, DOI: 10.1080/22221751.2025.2555722.
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